聯系我們Contact us
品系凈化是指，通過特定處理，消除病毒、細菌和寄生蟲，得到SPF級別動物的服務。維通達通過胚胎清洗和胚胎移植的方式，獲得SPF級別的動物；同時委托第三方提供相關微生物檢測服務，出具相關檢測合格報告。
1.服務類別
凈化服務，根據飼養環境不同分為兩類：IVC凈化和隔離器凈化。根據凈化級別，使用的代孕鼠和凈化方案、設施均不同。常用的凈化標準包括：（1）VAF/PLUS?；（2）GB-SPF；（3）VAF/ELITE?；（4）定制標準。
根據基因型不同，可以分為純合凈化或者雜合凈化。純合凈化需要準備一定數量，基因型均為純合的雌鼠和雄鼠；雜合凈化只需要提供基因型符合需要的2~3只可育雄鼠即可。
2.服務簡介
胚胎凈化的目的是獲得無特定病原體（Specific pathogen Free, SPF）動物，即體內無特定的微生物和寄生蟲存在的動物。常用的方法包括剖腹產和胚胎移植，但由于剖腹產不能消除垂直傳播的病毒（如鼠巨細胞病毒MCMV；淋巴細胞性腦膜炎病毒LCMV和腦胞內原蟲ECUN），且對于手術設施依賴程度較大，目前通過胚胎移植的方法，消除病毒、細菌和寄生蟲，是易行的品系凈化方法。
胚胎凈化的原理，是發育早期游離狀態的胚胎有透明帶，可以防止細菌、寄生蟲和大部分病毒的侵襲；通過無限稀釋的方法將透明帶外面的微生物含量降至極低的水平，移植到代孕的健康小鼠體內后，小鼠的免疫系統會清除掉這些微生物，而達到凈化的目的。國際胚胎移植協會推薦的標準，是在特定的培養液微滴中進行10次清洗，每次大約100倍的稀釋。即便如此，仍有凈化失敗的風險，例如，鼠的細小病毒（MMV），有研究發現其可以通過透明帶進入胚胎內部；有時采用的胚胎是通過體外受精（IVF），或透明帶受到破壞的胚胎（如冷凍、解凍），這些情況需要采用不同的策略。研究發現，通過胚胎移植進行凈化，胚胎的獲取方法（雌鼠和雄鼠的準備）和胚胎處理（洗滌和培養）策略，會影響胚胎凈化的結果[1~4]。胚胎獲取的方法中，采用雄鼠（攜帶病原體）與同品系雌鼠（SPF）交配的方法獲得胚胎，后代凈化污染病原的風險很低；可以不需要對胚胎進行微生物分析，即雜合凈化[2]。胚胎處理常用的方法是多次洗滌和一定時間的培養[1,3]。若胚胎是通過IVF，或透明帶受到破壞的胚胎（如冷凍、解凍），需要對胚胎培養液進行分析，以確認是否有病原微生物的污染，這些凈化后代需要每窩分別檢測[4]。
為了確保凈化成功，需要對凈化的流程進行標準化控制（見圖示）。①凈化前，對凈化品系的病原感染情況進行評估，如對清洗胚胎的溶液進行Q-PCR分析，確認病毒含量；②凈化時，凈化品系與SPF野生雌鼠交配獲取胚胎，降低病毒通過透明帶進入胚胎的概率；③凈化后，對哨兵鼠或凈化大小鼠進行微生物檢測確認病原是否凈化掉。由于從微生物感染到檢測出來有一定的潛伏期，因而應根據具體的情況制定相應的策略。
常用的凈化標準有GB-SPF、FELASA、VAF/PLUS?和VAF/ELITE?等。檢測的微生物項目越多，產生的檢測費用也會越多。但是對于特定研究而言，也不是檢測的項目越多越好，應根據實際的實驗要求選擇相應的標準。一般選擇的原則是：免疫缺陷動物需要采用隔離器凈化（排除環境菌）；非免疫缺陷動物采用IVC凈化即可（一般不需要排除環境菌）。IVC凈化的代孕母鼠來自于屏障設施，隔離器凈化代孕母鼠來自于隔離器，后者購鼠費用和飼養費用較高，特別是對于特殊品系，1個品系就需要使用1個隔離器3~4個月時間。我們可根據客戶需求增加檢測項目，費用根據檢測項目增減。
通常情況下獲得符合健康標準的動物模型，就可以排除微生物的干擾，進行擴繁或開始正式的實驗。
參考文獻：
[1] Risks of transmissible diseases in relation to embryo transfer. Reprod. Nutr. Dev. 41 (2001) 439–450
[2] Embryo Transfer Rederivation of C.B-17/Icr-Prkdcscid Mice Experimentally Infected with Mouse Parvovirus 1. Comparative Medicine. Vol 58, No 4 August 2008 Pages 353–359
[3] Rederivation by Embryo Transfer in Strains of Laboratory Mice and Rats. Russian Journal of Genetics: Applied Research. 2013, Vol. 3, No. 4, pp. 305–315
[4] www.jax.org/jaxmice/health Aligning Health Surveillance and Risk in Embryo Transfer, Embryo wash testing.
