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    無需跑膠,無需轉膜!比Western Blot更便捷、準確的Simple Western來啦!

    2023-04-23 文章來源: 瀏覽量: 分享到:

    Q

    圖片



    什么是Simple Western?

    它的工作原理是什么?

    A

    采用微量樣品管,以一根毛細管作為載體,結合專利的內涂層技術,可以實現在同一樣品管中完成樣品的上樣、分離、固定、免疫放大和化學檢測,并自動進行數據分析,整個過程無需人工干預, 可有效提高檢測結果的準確性和可重復性。



    Q

    Simple Western的作用是什么?

    A

    與傳統western blot 一致,都能夠檢測蛋白表達量。

    Western Blot中文一般稱為蛋白質印跡。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息。



    Q

    與傳統western blot相比,

    Simple Western有哪些優點?

    1

    實驗流程標準化、自動化


    Simple Western 技術可實現所有檢測步驟的自動化,包括蛋白分離、固定、免疫印跡、洗滌、檢測及數據分析等??杀苊鈧鹘y方法因實驗步驟繁多、檢測流程較長而最常導致的結果重復性差問題。



    2

    上樣量小于傳統western blot,節約珍貴樣品



    由于采用了毛細管電泳微縮技術,單個樣品上樣體積只需 3~5 μL,濃度 0.1~4 μg/μL,因此可嘗試數目有限的流式分選細胞、干細胞、珍稀的臨床組織等等,而傳統 WB 往往需要 20~100 μg 總蛋白。因此,上述珍稀樣品往往不足以進行蛋白水平的實驗,導致中心法則證據不完整。


    3

    蛋白分子量檢測范圍寬


    2~440 kDa;由于蛋白固定機理與傳統 WB 不同,因此 Simple Western 可檢測高達幾百 KDa 的大分子量蛋白,不需再摸索任何轉膜條件;而在傳統 WB 操作中,大分子量蛋白轉膜效率極其低下,甚至完全無法轉印。



    4

    數據分析標準化、自動化


    軟件將自動給出蛋白的表達豐度等數字信息,不需進行人工灰度分析, 數據分析不受傳統 WB 條帶形狀、背景信號等干擾,避免主觀傾向,更易被雜志認可;數字化定量數據亦可直接方便進行條形圖繪制、T 檢驗、方差分析等統計實現。


    5

    條帶圖片漂亮規則,更易發表


    Simple Western 技術將底層物理發光信號光斑轉換成正態分布峰圖,進而根據峰圖輸出規則美觀的條帶。傳統 WB 中經常出現的啞鈴條帶、微笑條帶、過曝空斑、背景噪點等問題,這不僅影響條帶美觀度,在條帶圈選定量、背景扣除時也將引入很大的偏差,為了得到一張可發表的實驗圖片, 往往需要進行 n 多次重復實驗。Simple Western 技術不僅保留了生物學意義上的表達關系,條帶呈現形式也更加賞心悅目,結果更易被雜志接收。



    6

    樣本通道完全獨立,樣本通道可自由組合、自由排列


    各樣本通道完全獨立,在同一輪檢測實驗中,每個樣本通道中可以各自檢測不同種類的蛋白質,即每個樣本通道中均可以各自使用不同抗體孵育,各樣本通道間互不干擾;每根毛細管對應一個泳道,由于毛細管彼此獨立,因此獲得原始實驗數據之后,可進一步將不同泳道進行排列組合,從不同角度闡釋實驗數據,一次實驗可獲得多張實驗圖片,從而避免了重復實驗。

    利用該儀器獲得的數據已經在多個期刊發表 (Boyer et al. 2018; Xu et al. 2022)?!?/span>




    Q

    做Simple Western 送樣有哪些要求嗎?

    A

    組織 (>100 mg):取樣后樣品立即在液氮中速凍5min,放置在-80℃保存,送樣時請在干冰中運輸,如果市內可以使用冰袋運輸;

    蛋白質溶液: 請在干冰中運輸;

    細胞 (>106): 請用冰袋維持在4℃運輸。



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